Provberedning:
Provsamling: Samla prover som blod, vävnad, saliv och urin enligt syftet med experimentet.
DNA -extraktion: Använd ett dedikerat DNA -extraktionssats för att extrahera DNA från provet.
PCR -reaktionsförberedelse:
Designprimers: Designspecifika primerpar baserade på målsekvensen för amplifiering av mall -DNA.
Förbered reaktionsblandningen: inklusive mall -DNA, primrar, buffert, DNA -polymeras, DNTP: er (deoxynukleosid -trifosfater), Mg 2+, etc.
Ställ in PCR -program:
PCR -instrumentinställningar: Ange förinställda PCR -cykelparametrar, såsom 95 graders förvärmningstemperatur, denatureringstemperatur (såsom 95 grader), glödgningstemperatur (såsom 55 grader), förlängningstemperatur (såsom 72 grader) och antal cykler.
PCR -reaktion:
Tillsätt prov: Tillsätt reaktionsblandningen i PCR -reaktionstanken eller chipet, och varje prov har vanligtvis en reaktion väl.
Utför PCR: PCR -instrumentet cyklar enligt förinställda programmet, inklusive uppvärmning, kylning, glödgning och förlängningssteg.
Produktanalys:
Kylning efter amplifiering: När PCR är klar kyls provet kort vid 4 grader.
Elektroforetisk separering: Använd gelelektrofores -teknik, såsom agarosgelelektrofores, för att separera PCR -produkter i olika längder.
Fluorescensskanning: Fluorescerande märkta primrar avger ljus av en specifik våglängd i den förstärkta produkten, och PCR -instrumentet läser dessa signaler och registrerar dem.
Databehandling och tolkning:
Programvara för dataanalys: Använd specialiserad programvara för att analysera den fluorescerande signalen och beräkna koncentrationen eller relativ koncentration av målfragmentet.
Resultat Tolkning: Baserat på PCR -kurvan och baslinjen, bestäm om PCR är framgångsrik, om målfragmentet finns och hur mycket det är.
Resultatinspelning och bevarande:
Registrera resultaten i den experimentella rapporten och bevara korrekt originaldata och prover.